cDNA文库的构建、克隆和筛选常用大肠杆菌作为受体菌。大肠杆菌质粒或噬菌体常作为cDNA文库构建的载体。已知天然大肠杆菌质粒上有氨苄靑霉素抗性基因，而噬菌体使细菌裂解后会在培养基上产生肉眼可见的噬菌斑

cDNA文库的构建、克隆和筛选常用大肠杆菌作为受体菌。大肠杆菌质粒或噬菌体常作为cDNA文库构建的载体。已知天然大肠杆菌质粒上有氨苄靑霉素抗性基因，而噬菌体使细菌裂解后会在培养基上产生肉眼可见的噬菌斑。请冋答下列问题：

（1）作为载体，质粒与T2噬菌体在结构上的区别是__________，已知DNA序列与载体DNA分子连接后导入宿主细胞可克隆（扩增）DNA片段，在前述两种载体中，能够克隆大片段DNA的是________________。

（2）筛选文库的过程：第一步，将普通培养基上培养的大肠杆菌用尼龙膜（具有吸收DMA的功能）转移到含氨苄靑霉素的培养基上培养，一段时间后发现含重组质粒或含重组噬菌体的大肠杆菌在培养基上的生长情况不同，前者_________、后者___________；第二步，用尼龙膜影印培养基后正面朝上置于另一培养皿中，用碱使双链DNA__________(填“解旋成为单链”或“分解为脱氧核苷酸”）；第三步，将尼龙膜浸入用______________作为探针的溶液中，保温后检测膜上是否出现________，从原始普通培养基上找到相应的区域即可得到含目的基因的大肠杆菌。

（3）作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含_________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。

【答案】

质粒是双链环状DNA，噬菌体是含蛋白质和核酸（DNA）的病毒噬菌体在培养基上长出菌落在培养基上先长出菌落后出现噬菌斑解旋成为单链放射性同位素标记的目的基因（单链）杂交带氨苄青霉素抗性

【解析】

基因工程的“分子运输车”--载体：（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存；②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入；③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（1）质粒是小型环状双链DNA分子，而T2噬菌体是一种DNA病毒，其主要成分是DNA和蛋白质。质粒是小型环状DNA分子，只能插入小片段的DNA分子进行扩增；而T2噬菌体的DNA是链状的，在大肠杆菌体内可以大量繁殖，因此其与DNA序列结合后导入宿主细胞可克隆（扩增）大片段DNA片段。

（2）根据题意分析，已知天然大肠杆菌质粒上有氨苄靑霉素抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌在含氨苄靑霉素的培养基上可以生长，出现大肠杆菌菌落；含重组噬菌体的大肠杆菌在含氨苄靑霉素的培养基上也可以生长出菌落，后来随着噬菌体的繁殖，大肠杆菌裂解，在培养基上又出现了噬菌体形成的噬菌斑。根据第三步中的探针可以推知第二步中的碱应该是将双链DNA解旋为单链DNA；然后第三步中用放射性同位素标记的目的基因（单链）作为探针与之杂交，检测膜上是否出现杂交带。

（3）氨苄青霉素抗性基因作为标记基因可以检测重组质粒是否导入受体细胞，因此作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含氨苄青霉素抗性基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。