请回答下列有关基因工程及其应用的问题：

请回答下列有关基因工程及其应用的问题：

(1)多种限制酶和____________，以及逆转录酶的发现，为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。

(2)基因工程的核心步骤是_________________________；重组Ti质粒载体结构中T-DNA的作用是________________________。

(3)科学家设法使烟草细胞形成微创伤，受伤部位细胞产生的乙酰丁香酮可吸引农杆菌向受伤部位集中，这时农杆菌携带某种目的基因进入烟草细胞。获得的转基因烟草细胞通过______________________技术最终获得转基因烟草，检测烟草细胞是否成功导入该目的基因的方法是_______________。

(4)利用________________处理植物体细胞可得到原生质体，将目的基因导入原生质体的方法中，除题(3)所述方法外，还可采用___________________。

【答案】

DNA连接酶 构建基因表达载体 携带目的基因进入植物细胞并整合到植物细胞中染色体的DNA上 植物组织培养 DNA分子杂交技术 纤维素酶和果胶酶 基因枪法

【解析】

基因工程的基本工具是：限制酶、DNA连接酶和运载体；基因工程的基本步骤是：目的基因的获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

（1）切割目的基因需要用限制酶、利用反转录法获得目的基因需要用到逆转录酶，而将目的基因与运载体相连需要用到DNA连接酶。

（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体；重组Ti质粒载体结构中T-DNA为可转移DNA，可以携带目的基因进入植物细胞并整合到植物细胞中染色体的DNA上。

（3）将获得的转基因烟草细胞最终培养成转基因烟草需要用到植物组织培养技术；检测目的基因是否导入烟草细胞可以采用DNA分子杂交技术。

（4）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此利用纤维素酶和果胶酶处理植物体细胞可得到原生质体；将目的基因导入原生质体的方法中，除了利用农杆菌转化法，还可以利用基因枪法。