红酵母是酵母菌的一种，在自然界中分布非常广泛，水池边、土壤表层的红色附着物就是红酵母菌落。用红酵母发酵生产胡萝卜素具有成本低、周期短、菌体无毒不会产生有害物质等优良特点。回答下列问题：

红酵母是酵母菌的一种，在自然界中分布非常广泛，水池边、土壤表层的红色附着物就是红酵母菌落。用红酵母发酵生产胡萝卜素具有成本低、周期短、菌体无毒不会产生有害物质等优良特点。回答下列问题：

（1）分离、纯化、培养红酵母的过程需要避免杂菌污染，用酒精和紫外灯均可杀灭杂菌，但两者灭菌的原理不同。酒精能够使细胞内的蛋白质__________，从而达到杀灭杂菌的目的。紫外线具有一定的杀菌作用，原因是紫外线能够损伤细胞内的__________，使微生物不能进行正常的生命活动。要获得高产胡萝卜素红酵母，首先得分离、纯化红酵母，常用的接种方法有________________。

（2）培养基上有菌落形成后，挑选__________的菌落进行扩大培养，发酵后经离心收集菌体并测定菌体生物量和胡萝卜素的产量，以获得高产胡萝卜素红酵母。扩大培养过程中需要进行计数，取0.2mL稀释度为105的稀释液接种在一个培养皿的培养基上，选出三个平板计数，菌落数分别为200、220、180，则稀释前样品中红酵母的密度为_________个/mL。该统计结果往往低于活菌的实际值，原因是__________。

（3）经过发酵培养获得大量的酵母菌后，将酵母菌破碎，然后用有机溶剂进行萃取，选用的有机溶剂，除能够充分溶解胡萝卜素外，还需具有_____________的特点。

【答案】

变性DNA(核酸)平板划线法、稀释涂布平板法红色、较大108有些菌连在一起形成了一个菌落较高沸点、不与水混溶

【解析】

酒精可使蛋白质变性失活而导致细菌死亡，紫外线还可破坏微生物机体细胞中的DNA或RNA的分子结构，使微生物不能进行正常的生命活动，达到杀菌消毒的效果。微生物的培养和分离方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法；在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为200，涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL，故每毫升样品中的菌落数是200÷0.2×105=1×108；由于在涂布时可能出现两个或多个细菌连在一起的情况，使测定的密度少于实际的数量；胡萝卜素化学性质比较稳定，不溶于水，易溶于有机溶剂，常用有机溶剂萃取，萃取过程为：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素，萃取过程中采用水浴加热，萃取剂常用石油醚。

（1）酒精能够杀菌的原理是酒精可使细胞内的蛋白质变性失活；而紫外线杀菌原理是紫外线能够损伤细胞内的DNA；分离、纯化红酵母的常用接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

（2）红酵母能形成红色菌落，因此可挑选培养基上比较大的红色的菌落进行扩大培养；三个平板肿菌落数分别为200、220、180，平均为200个，则稀释前的红酵母密度=200÷0.2×105＝1×108个/mL；由于有可能有2个或多个酵母菌在一起没有分离，往往在培养基上连在一起形成了一个菌落，因此该统计结果往往低于活菌的实际值。

（3）萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。