组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，现欲利用基因工程技术将tPA基因导入奶牛成纤维细胞中，并通过核移植技术获得克隆转基因奶牛，最后从奶牛乳汁中获取组织型纤溶酶

组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，现欲利用基因工程技术将tPA基因导入奶牛成纤维细胞中，并通过核移植技术获得克隆转基因奶牛，最后从奶牛乳汁中获取组织型纤溶酶原激活剂。请回答：

（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到______________上，通过大肠杆菌培养扩增。构建重组DNA分子时，需要用到的工具酶有__________________________，为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有________。

（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控__________发育的作用。通过__________技术,将重组细胞培养成早期囊胚。将早期囊胚移植到代孕受体之前需要经过__________处理，以便成功植入或着床。

（3）为了繁殖更多后代，可以通过胚胎分割技术，产生同卵多仔。下列关于该技术的叙述,错误的是_____。

A.增加胚胎数量，快速繁殖

B.可以采用相关酶处理卵裂球

C.该技术涉及显微操作技术

D.同卵多仔的表现型一定相同

【答案】

质粒 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 抗生素抗性基因 异源细胞核 胚胎体外培养 同期发情 D

【解析】

基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体．用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。

（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增。构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次要求DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA；为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有抗生素抗性基因等作为标记基因。

（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控异源细胞核发育的作用；通过早期胚胎培养技术，将重组细胞培养成早期囊胚；胚胎移植前，需要经过同期发情处理，使供受体的生理状态相同，以便成功植人或着床。

（3）胚胎分割技术能增加胚胎数量，快速繁殖，A正确；不同阶段的胚胎进行胚胎分割时，可采用的方法有一定的差别，若胚胎处于卵裂期可以采用酶解法或机械法，若囊胚则只能运用机械法分割，且要求等份分割，B正确；胚胎分割技术涉及显微操作技术，C正确；生物的性状由基因型与环境共同决定，因此同卵多仔的基因型相同，但表现型一定相同，D错误。