“贵州茅台”被誉为我国的国酒，虽然工艺并不复杂，但是大家公认其独特品质的关键是当地的独特气候、水质、以及当地空气或环境中存在独特的微生物。为了提取当地环境中的独特菌种，某研究小组以优质高粱、上等小麦为

“贵州茅台”被誉为我国的国酒，虽然工艺并不复杂，但是大家公认其独特品质的关键是当地的独特气候、水质、以及当地空气或环境中存在独特的微生物。为了提取当地环境中的独特菌种，某研究小组以优质高粱、上等小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的微生物。回答下列问题：

（1）该培养基按成分分类，属于___________培养基，培养基在接种微生物前，必须先进行___________（灭菌方式）。

（2）将上述培养基暴踩在空气中培养一段时间后，取10g该培养基，用无菌水制成l00mL样品溶液，再将样品溶液稀释104倍后，各取样品溶液0.1 mL在5个细菌培养基平板上接种，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为48、50、51、52、54。该过程采取的接种方法是___________，每克培养基样品中的细菌数量为___________个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较实际值___________，原因是_________________________________。

（3）生产酒的主要微生物是酵母菌，其代谢类型是___________，其产物乙醇与___________试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验。

【答案】

天然高压蒸汽灭菌稀释涂布平板法1.75小死菌不能形成菌落；两个或多个菌体未分离形成一个菌落异养兼性厌氧型（酸性）重铬酸钾

【解析】

该培养基是以优质高粱、上等小麦为原料制作的，高粱和小麦等原料中各种成分含量未知，属于天然培养基，培养基在接种微生物前，必须先进行灭菌，对培养基一般使用高压蒸汽灭菌；用于计数细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数；该土壤每克样品中的菌落数为（156+178+191）÷3÷（10÷100）×105=1.75×108。由于死菌不能形成菌落，以及两个或多个菌体未分离往往统计的是一个菌落，所以用此计数方法测得的细菌数偏少；酵母菌是真核生物，是异养的兼性厌氧型生物，检测乙醇用酸性重铬酸钾溶液，反应呈灰绿色。

（1）该培养基有未知成分，按成分分类属于天然培养基；培养基在接种微生物前，必须先进行高于蒸汽灭菌。

（2）由于该过程需要进行菌落计数，因此采取的接种方法是稀释涂布平板法；每克样品中的细菌数量=（156+178+191）÷3÷（10÷100）×105=1.75×108个；本方法计数方法测得的细菌数较少，原因是死菌不能形成菌落以及存在两个或多个菌体未分离的情况。

（3）酵母菌代谢类型是异养兼性厌氧型，其产物乙醇与酸性重铬酸钾试剂反应呈现灰绿色。